Nosotros hicimos una transfección a células LBC (son células tumorales de la linea que se esta utilizando en la investigación) con plásmidos con GFP. Este gen GFP produce florescencia, por lo que se puede ver y tomar fotos de las células transfectadas a fin de poner en punto el procedimiento.
Qué fue lo que hicimos:
Para la transfección se necesita tener 10000000 células en 400 microlitros y 50 microgramos del plásmido.
Contando las células con cámaras de NewBawer, sacamos la conclusión de que teniamos 10000000 células en 270 microlitros. Agregamos 14 microlitros con los plásmidos y 116 de medio para llevar a volumen (RPMI + 1% glutamina + 1% Penic. estreptomicina + 20% suero fetal bovino)
Ese volumen se lo pone en una cubeta para transfección y se la coloca en el electroporador:
Voltaje: 300 Volts
Tienpo:30.4 milisegundos
Capacitancia: 0.75 microfaraday
Resistencia: infinita
Luego a las 24 horas se le agrega G418 o genetocin que es el antibiótico de selección.
Y obtuvimos:
A las 24 horas
A las 72 horas
Transfección estable:
